RFL-6大鼠成纤维细胞培养手册

一、细胞培养条件

细胞名称： RFL-6大鼠成纤维细胞

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法： 第一次建议1:2传代。传代情况为：2天换液。如对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞脱落，轻轻吹打后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，24小时后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天，更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，一些细胞可能因为贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清作对比培养。对沉淀加入胰酶进行处理，然后按传代步骤进行。

五、售后条款

1) 细胞出现问题，可重发的情况

• 细胞在运输中遭遇问题，如丢失、瓶身破损等，重发。
• 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供实验结果，核实后重发。
• 常温发货的细胞静置24小时，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未存活，需提供真实清晰状态照片，重发。
• 如细胞在合适条件下出现污染，重发。
• 细胞活性问题，需在7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色检验活力，核实后重发。

2) 不予重发的情况

• 因客户原因造成的细胞污染，不重发。
• 不当操作致使细胞状态不佳，不重发。
• 非推荐培养体系导致的细胞状态不佳，不重发。
• 未提供细胞培养前三天照片，不重发。
• 细胞收到后两天内未反馈问题，不重发。

如需了解更多关于尊龙凯时品牌的细胞培养知识，请访问我们的官网或咨询我们的服务团队。我们的目标是确保每位用户获得最佳的细胞培养体验。