人卵巢癌细胞A2780的培养及处理指南

一、细胞培养条件

尊龙凯时的人卵巢癌细胞A2780具有贴壁生长特性。其适宜的冻存条件为无血清冻存液，培养体系为1640培养基+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%P/S。该细胞在培养过程中，少量细胞可漂浮。传代建议初次为1:2，培养液建议每2天更换。

注意：应使用无菌离心管收集培养基，而后进行过渡对比培养。如对比培养效果不佳，推荐直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、收到细胞后的处理

细胞收到后，须培养至良好状态并灌满完全培养液，密封瓶口是最佳运输方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后置于超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2培养箱，静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行处理。观察细胞生长情况并拍照保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞的汇合度未超过80%时，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5%CO2孵箱培养；如细胞密度超过80%，则进行传代。具体步骤为：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，立即加5ml以上完全培养基以停止消化。
3. 轻轻吹打细胞直至完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液停止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱，如需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请穿戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%的酒精消毒外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5%CO2培养箱内培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞特性如贴壁不牢固可能会导致在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期对比培养），沉淀细胞后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止反应。再次离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况包括：
1. 运输过程中发生细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，均可重发；
2. 收到产品后48小时内若存在污染问题，请提供真实实验结果，核实后重发；
3. 常温运输的细胞静置24小时后，或干冰运输的细胞复苏后24小时内若大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可进行重发；
4. 复苏后24小时内出现污染问题，尤其是干冰运输的细胞，亦可重发；
5. 若产品的细胞活力不佳，请在收到后7天内用台盼蓝染色法进行检测并反馈实验结果，核实后重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天内请拍照如有问题，3天未反馈则视为产品合格。
对于4-7天内出现问题的，需提供收到细胞前3天的照片以及出现问题时的照片与详细操作步骤，技术人员判定为我方责任时可重发，若判定为双方责任，将协商处理或者按合同价的50%重发。

2）不予重发的情况包括：
1. 客户自行造成细胞污染；
2. 客户错误操作导致细胞状态不佳；
3. 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳；
4. 出现不良状态但未提供细胞培养前3天的照片；
5. 细胞培养过程中经过其它处理；
6. 收到细胞2天内未反馈的；
7. 具体情况另行处理。