人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：MEM+10% FBS + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

贴壁传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代。换液情况：每2天更换培养液。

备注：收集瓶中培养基的无菌离心管，以便于过渡对比培养。如果效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培养至良好状态后用完全培养液灌满细胞瓶并封好。运输细胞的最佳方式为将其放置于37℃、5% CO2培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞状态，之后进行处理。

使用显微镜观察细胞生长情况并拍照记录（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，而另一瓶使用自制的完全培养基进行对比培养，并略微松开放瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未达到80%汇合度时，将培养瓶中的完全培养液收集到离心管中，保留5ml培养基并放入37℃、5% CO2培养箱孵育。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱保存，24小时后可转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种于T25瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，运输过程中可能出现细胞脱落情况，属正常现象。如脱落较多，可以将所有培养液收集至离心管，冷冻后再进行操作。

五、售后条款

1）细胞问题的重发情况

如细胞在运输过程中遇到问题（如丢失、破损等）或在48小时内出现污染且提供真实实验结果者，尊龙凯时可予以重发。对于细胞复苏后存活率低且提供照片的情况，也可进行重发。

2）不予重发的情况

如客户造成的污染、操作不当或不符合推荐的培养体系导致的问题，尊龙凯时将不予重发。

如需更多信息，请咨询尊龙凯时相关技术支持。