编者按：近年来，斑马鱼Crispant技术作为基因编辑领域的重大突破，因其高效性、低成本和操作简便等优势，逐渐成为疾病机制研究、药物筛选及功能基因组学的理想工具。未来，这项技术在精准治疗中有望发挥更大的潜力。Crispant技术通过结合CRISPR/Cas9，将Cas9蛋白与靶点gRNA混合后注射到斑马鱼的1细胞期，从而获得F0代的敲除嵌合体斑马鱼，实现整体基因敲降，便于直接进行表型观察和基因功能研究。

相较于m啡啉介导的基因敲降技术，Crispant具备以下优势：

01 研究周期短

最快2周即可观察到胚胎期表型，通常在4周内便可提供包括靶点效率验证的完整研究报告。

02 可在任何发育阶段观察表型

与m啡啉不同，Crispant技术能够在基因组水平进行有效的基因编辑，导致目的基因发生移码突变或蛋白翻译提前终止，从而实现持续的基因敲降，表型可从胚胎观察至成年。

03 毒副作用低

m啡啉易引发毒副作用，尤其在激活p53信号时会产生非特异性表型。这常常需要合成两条m啡啉相互验证（增加成本）。而Crispant能有效设计和筛选出多个高效且特异的靶点，通过共同注射多个靶点达成完全基因敲除效果，毒副作用相对更低。

04 可同时敲降多个目标基因

在斑马鱼中，目的基因往往具备多种亚型，使用多个m啡啉进行同时注射可能导致胚胎致死或出现非特异性表型。而Crispant技术能够有效针对多个基因进行同时敲降，且非特异性表型的产生几率较低。

05 便于后续稳定品系构建

通过Crispant筛选获得的靶点可直接用于稳定斑马鱼品系的构建，从而节省了品系构建所需的时间和费用。

应用场景

Crispant技术通过多重sgRNA协调编辑和F0代表型直筛，使得基因功能研究的周期缩短至传统方法的1/5，成本降低50%以上。这一高效、低成本且易于操作的特点，使其成为疾病模型构建、基因功能解析和药物筛选的理想工具。

01 疾病模型构建

已有研究利用Crispant技术建立癫痫模型，通过敲除irf2bpl或cars2基因模拟患者抽搐表型，从而开展抗癫痫药物筛选。此外，还能用于凝血障碍模型构建，敲除adcyap1b基因导致凝血因子下调，表现为自发性出血，适用于抗血栓药物的评估。

02 基因功能解析

研究者通过敲除kctd10基因诱导心脏线性畸形，推动心脏发育的研究；同时，通过敲除rfx6基因诱导糖尿病样表型，助力胰腺功能的研究。

03 药物筛选

研究中已经通过敲除斑马鱼的cars2、Sigirr、cbsb基因等诱发相关表型，应用于神经系统疾病、抗感染与免疫调节、代谢与罕见病以及肿瘤个性化等药物筛选。

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