产品及特点

尊龙凯时推出的本检测试剂盒是基于探针法荧光定量PCR原理研发的，具备以下特点：

产品特点

• 即开即用：用户只需提供样品DNA模板。
• 高灵敏度：引物及其他组分经过优化，确保高检测灵敏度。
• 阳性对照：提供阳性对照，以便有效区分假阴性样品。
• 高特异性：引物根据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计，避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。
• 多功能检测：可进行定性和定量检测，定量检测的线性范围至少为5个数量级。
• 丰富的反应次数：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
• 科研专用：本产品仅供科研用途。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

使用用户自选的方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市面上多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度高，以下稀释操作需在独立区域进行，避免污染其他样品或试剂。

1. 标记6个离心管，分别命名为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个离心管中加入45μL的DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照，充分震荡后获取1×10^E7拷贝/μL的标准样品，并置于冰上待用。
4. 依次换枪头，将稀释样品逐级稀释至1×10^E6和1×10^E5拷贝/μL。
5. 重复上述操作直至得到6个稀释度的标准曲线样品。若无需制作标准曲线，则只需将阳性对照稀释至1×10^E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品数量N，准备N+2个qPCR管（包含阴性对照和阳性对照），并加入相应的试剂成分（详见说明书）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置在PCR扩增仪器的相应位置，进行扩增。具体的扩增程序请参照说明书。

六、结果分析

若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线，从中计算待测样品的DNA浓度；若未制作标准曲线，可通过以下标准判定结果：

• 阳性对照结果：Ct值<30，呈现明显的指数增长和典型的S型曲线。
• 阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显的指数增长期及平台期。
• 样本检测结果：Ct值<35，表示阳性；Ct值38或无Ct值为阴性；Ct值介于35-38之间需复检。

运输与保存

产品应低温运输，储存温度为-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。